Gαi1蛋白作为异源三聚体G蛋白的一部分，是GPCR介导的细胞内信号传导所必需的分子开关，通过在非活性GDP结合状态和活性GTP结合状态之间切换[1]。开关机制的失调与各种疾病有关，包括不同类型的癌症，使Gαi1蛋白成为药物研究中有吸引力的治疗靶点[2-4]。过去已经描述了使用荧光GTP类似物来处理Gαi1蛋白的几种方法，缺乏对蛋白的鸟嘌呤核苷酸结合活性和活性蛋白的分数的准确测定。
Pepanian等人最近开发了一种基于荧光各向异性（FA）的方法，用于测定GTP结合位点的结合亲和力并定量Gαi1蛋白活性[5]。由于常用的基于MANT和BODIPY[6-9]的探针缺乏对基于FA的测定的广泛适用性，因此开发了新一代荧光素（FAM）标记的GTP类似物，其具有用于FA测定的有益性质，包括高量子产率和相对短的激发态荧光寿命（3.8 ns）[5]。已鉴定出两种用于Gαi1的高亲和力探针y-[（4-氨基丁基）三唑]-GTP-5-FAM和y-[（6-氨基己基）三唑]-GTP-5-FAM（KD值在一位数nM范围内），与MANT GTPγS和BODIPY FL GTPγS相比，其水解稳定性和结合亲和力均有所改善[5]。
图1：与BODIPY FL GTPγS相比，5-FAM标记的GTP类似物具有改善的稳定性和对Gαi1蛋白的亲和力。
A）γ-[（4-氨基丁基）三唑并]-GTP-5-FAM（NU-1219- 5 FM）、γ-[（6-氨基己基）三唑并]-GTP-5-FAM（NU-1220- 5 FM）和BODIPY FL GTPγS（NU-973）的化学结构。
B）通过基于荧光各向异性的方法测定荧光GTP类似物的结合亲和力的测定方案。（图改编自Pepanian et al. [5]）
C）γ-[（4-氨基丁基）三唑]-GTP-5-FAM（NU-1219- 5 FM）、γ-[（6-氨基己基）三唑]-GTP-5-FAM（NU-1220- 5 FM）和BODIPY FL GTPγS（NU-973）在Gαi1蛋白上的解离常数（KD）[5]。
表1：可用的Gαi1特异性探针
| 目录号 | 产品 | 规格 |
|---|---|---|
| NU-1219-5FM | y-[（4-氨基丁基）三唑]-GTP-5-FAM | 纯度：>/= 95%（HPLC） 浓度：1.0 mM - 1.1 mM pH值：7.5 ± 0.5 |
| NU-1220-5FM | y-[（6-氨基己基）三唑]-GTP-5-FAM | 纯度：>/= 95%（HPLC） 浓度：1.0 mM - 1.1 mM pH值：7.5 ± 0.5 |
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