教你如何测量和定量细胞提取物中存在的聚 ADP-核糖基化总量

PAR 稳态受 PAR 聚合酶 （PARP） 和 PARG（聚（ADP-核糖）糖水解酶）家族的调节，以响应细胞应激条件。ADP 核糖基化是将 ADP-核糖添加到蛋白质中，是主要参与 DNA 损伤反应 （DDR） 通路的蛋白质的可逆翻译后修饰。Poly-ADP-ribosylation（称为 PARylation）是 ADP-核糖的线性或支链的添加。PARP 和 PARG 活性与炎症、缺血、中风和癌症中的细胞反应有关。PARP 抑制剂已成功用于癌症治疗，当同源重组修复 （HRR） 已经存在缺陷时，会导致合成致死。PARG 在乳腺癌中过表达，并与肿瘤生长和存活相关。PARG 活性的降低可以增强当前癌症疗法（如化疗和放疗）的效果，使选择性抑制剂抑制 PARG 成为癌症和免疫疗法中一种很有前途的方法。对 PARP 和 PARG 的进一步研究将阐明 PARylated 蛋白的水平如何导致疾病，并可以被调节以提供治疗益处。

LysA? 通用 PARylation 检测试剂盒是一种基于 ELISA 的夹心试剂盒，旨在测量和定量细胞提取物中存在的聚 ADP-核糖基化总量。该试剂盒采用方便的 96 孔规格，包含所需的所有试剂，包括 PAR 标准品，可用于建立定量测量的标准曲线。它含有足够的抗体、封闭缓冲液和检测试剂，可在 96 孔板规格中测量细胞提取物中的 PARylation 水平。它还包括细胞裂解物作为检测性能的对照。

注意：该测定仅适用于 Poly-ADP-核糖基化检测。该检测在 100 pM 至 20 nM PARylation 范围内呈线性。

图 1：LysA? 通用 PARylation 检测工作流程图。

使用抗 PAR 抗体包被 96 孔板。将细胞裂解物添加到包被孔中，因此细胞裂解物中存在的 PAR（PARylated proteins）被抗体捕获。随后与抗 PAR 一抗和 HRP 标记的二抗孵育。添加化学发光 HRP 底物可提供发光信号，该信号与细胞提取物中存在的 PAR 量直接相关

BPS bioscience总部坐落于美国圣地亚哥生命科学研究机构和公司集中地的中心。公司主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶及其抑制剂的筛选试剂盒。BPS公司为药物研发用重组酶类的提供了重要的选择。