补体C4d（Complement C4d）检测试剂盒

补体系统在自身免疫和感染性疾病中发挥着重要作用。补体激活有三条途径：经典途径、替代途径和凝集素途径。C4d蛋白是经典途径和凝集素途径的产物。

C4d是补体C4激活过程中产生的降解终产物，在1990年代被认定为一种生物标志物，因为它的稳定性和与抗体介导的排斥反应的强关联。在过去的二十年中，C4d在系统性红斑狼疮（SLE）中的潜在重要性被强调，作为诊断和监测SLE的工具（1）。特别是，C4d与SLE肾炎相关（2）。在原发性干燥综合症（pSS）中，C4d水平与抗-SSB抗体和κ/λ比率相关，建议其作为pSS患者中抗体反应和补体激活的适当标志物（3,4）。研究表明，抗体相关性血管炎患者的C4d血浆水平显著高于狼疮肾炎患者和正常对照组（5）。肾小管周围的C4d沉积是长期移植物存活率的重要预测因子，并具有预后意义（6）。C4d在肺癌患者的生物样本中增加，并与早期肺癌的不良预后相关（7,8）。C4d越来越被认为是一个潜在的生物标志物，能够指示抗体可能导致的组织损伤，例如系统性自身免疫疾病。C4d有潜力检测处于抗体介导疾病后果风险中的患者。此外，开发新的阻断补体激活的治疗药物使得C4d成为一个标志物，有可能识别和监测可能从这些药物中受益的患者（9）。基于线性新表位的补体检测已被报道相较于构象表位具有优势，因为它降低了假阳性的风险并提高了特异性（10）。该补体检测基于在激活后C4的切割位点暴露的短线性C4d新表位的检测。

艾美捷补体C4d检测试剂盒（Complement C4d）（#COMPLC4dRUO）的测定原理：

该装置为一种比色法夹心ELISA。样本在检测稀释液中稀释，100?L稀释样本被转移到微孔板中，并在室温下孵育60分钟。在第一次孵育期间，样本中的C4d被预涂在微孔板表面的抗C4d-Neo单克隆抗体捕获。洗涤以去除未结合的物质后，加入第二种辣根过氧化物酶（HRP）标记的单克隆抗体，该抗体能够结合C4d的两个等位变体（A和B）。经过30分钟的孵育后，再次洗涤孔，并添加底物进行孵育。30分钟后停止颜色发展，并在分光光度计中测量颜色。颜色的深浅与结合到孔中的C4d量成正比。C4d的量通过与校准样本的颜色发展进行比较来确定。

标本收集：

应使用无菌静脉穿刺技术收集血样，并使用标准程序获得EDTA血浆。建议每个样本至少抽取5毫升全血。离心血样并将无细胞血浆转移到干净的试管中。必须妥善处理血浆，以防止体外补体激活。

离心后的EDTA血浆可在4°C下保存最多8小时，分析应在此时间范围内进行。对于较长时间的储存，血浆应冷冻在-70°C或更低温度。样本不应冻融超过两次。

补体C4d检测试剂盒成分及试剂储存：

一个带有微孔（12x8）的框架，涂有抗C4d-Neo单克隆抗体，用铝箔包装并附有干燥剂包。

1.5毫升低对照（LC）。即用型。

1.5毫升高对照（HC）。即用型。

2x30毫升稀释液（Dil），红色。即用型。

15毫升含有HRP标记抗体的结合物，针对C4d。即用型。

15毫升底物TMB。即用型。

15毫升终止液（0.5M H2SO4）。即用型。

30毫升洗涤液，30倍浓缩。

6 x 1.5毫升的校准剂量，含有人重组C4d，浓度为0 ng/mL、5 ng/mL、25 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL和400 ng/mL。即用型。

结果计算：

从450纳米波长中减去620纳米参考波长，并计算所有样本的平均吸光度值。通过绘制校准样本的吸光度与浓度构建校准曲线。六种校准样本的浓度为0 ng/ml、5 ng/ml、25 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml和400 ng/ml。在本说明书的示例中使用了4参数曲线拟合（图1）。用户可以选择不同的曲线拟合。根据校准曲线读取未知样本的浓度。

注意：要计算血浆样本中C4d的浓度，必须进行稀释补偿，即根据上述协议进行50倍的补偿。如果选择了不同的样本稀释，应相应地进行补偿。

图1. 校准曲线示例

请注意：上图显示的是半定量标准曲线的示例，不应用于实际样本的解释。

补体C4d检测试剂盒文献参考：

1. Juan Li, Zhuoli Zhang, The Important Roles of C4d in Systemic Lupus Erythematosus,

Rheumatology (Sunnyvale) 2014, 4: 135. 4:2

2. Martin M, Smol?g KI, Bj?rk A, Gullstrand B, Okrój M, Leffler J, J?nsen A, Bengtsson AA,

Blom AM, Plasma C4d as marker for lupus nephritis in systemic lupus erythematosus.

Arthritis Res Ther. 2017 Dec 6;19(1):266. doi: 10.1186/s13075-017-1470-2.

3. Sudzius, G., et.al, 2014. Could the complement component C4 or its fragment C4d be a

marker of the more severe conditions in patients with primary Sjogren’ssyndrome?

Rheumatol. Int. 34, 235–241