活死细胞活力分析试剂盒助力研究坏胆固醇的好处

胆固醇，以LDL的形式，表现出一种有趣的能力，刺激T细胞对肿瘤的免疫潜力。

免疫疗法被认为是我们对抗癌症能力的重要一步。这个概念是，我们可以使用人体自身的免疫系统，和/或关于免疫监视过程如何感知癌细胞的关键信息，来靶向和抑制萌芽的肿瘤。一种在一些但不是所有患者中显示出希望的策略是靶向PD-1（程序性细胞死亡1）受体。这种蛋白质通常阻止T细胞攻击自己体内的其他细胞。但其配体PD-L1似乎在一些癌细胞中高度上调，使它们对T细胞攻击不可见。某些癌症药物如纳武单抗（Optivo）通过阻断PD-1/PD-L1相互作用发挥作用，从而刺激免疫系统杀死异常细胞（如肿瘤中的细胞）的自然趋势。

一些物质已被证明是生物标志物，或这种抑制性相互作用的“广播”，阻止免疫治疗的最大功效。简单的胆固醇分子就是这些生物标志物之一。在一些研究中，添加胆固醇可以改善接受癌症免疫治疗的患者的结果。但原因尚不清楚，很明显，过多的胆固醇对身体有害。因此，来自德国的一组科学家试图阐明胆固醇和T细胞之间复杂的相互作用，希望这种理解可以改善我们在肿瘤学领域的免疫治疗。

作者进行了一系列实验，其中血清LDL（低密度脂蛋白）或“坏”胆固醇水平与T细胞表型和代谢相关。他们使用CD-4⁺和CD-8⁺ T细胞并在体外培养它们。他们加入LDL并观察T细胞的反应如何，包括与肿瘤球体（模拟细胞聚集体特征的3D细胞模型）共培养的情况。使用流式细胞术，ELISA，氧气和pH监测，他们可以跟踪T细胞-和球状体-对不同水平的LDL补充的反应。使用TheWell Bioscience的Cyto 3D ™活-死测定试剂盒测定球状体的活力。

通过这些技术，作者发现大量LDL导致T细胞中PD-1的下调，并且这些T细胞显示出更“正常”的表型，活性氧（ROS）的产生减少。当这些T细胞与结肠直肠癌（CRC）细胞模拟物的球状体一起孵育时，确实可以抑制它们的活力。作者认为，这种增加的抗癌作用，通过更高水平的胆固醇刺激，可以由T细胞介导，这些T细胞不那么“疲惫”，更能够执行其肿瘤细胞杀伤功能。然而，在对胆固醇提出具体的治疗建议之前，还需要更多的研究来微调我们对这种复杂的细胞和分子舞蹈是如何进行的理解。

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活死细胞活力分析试剂盒

Cyto 3D^® 活死检测试剂盒用于通过使用快速一步染色程序在双荧光系统上进行分析来确定活/死有核细胞。该试剂盒推荐用于3D、2D涂层和单层培养的细胞/类器官的活力分析。

• Ready-to-use

• 快速

• 敏感

• 非常适合3D细胞培养

• 成本效益

吖啶橙子（AO）和碘化丙啶（PI）均为核染色（核酸结合）染料，用于本试剂盒。AO对活细胞和死细胞都是可渗透的，并将所有有核细胞染色以产生绿色荧光。PI仅穿透具有受损膜的有核细胞的膜，并将死细胞染色以产生红色荧光。由于淬灭，当细胞用AO和PI染色时，所有活的有核细胞发绿色荧光，所有死的有核细胞发红色荧光（PI通过荧光共振能量转移（FRET）降低AO的荧光强度）。无核物质，如红细胞，血小板和碎片不发荧光，被荧光显微镜忽略。

文章来源：

• Babl, N., Hofbauer, J., Matos, C., et al. Low-density lipoprotein balances T cell metabolism and enhances response to anti-PD-1 blockade in a HCT116 spheroid model. Frontiers in Oncology, 2023; 13, 1107484. doi: 10.3389/fonc.2023.1107484.