酶促碳释放试剂盒助力了解糖基化是否影响VEGFR2的核转位。

Zhang等人就VEGFR1和VEGFR2表达调控的机制发表了在线研究《VEGF-dependent tumor angiogenesis requires inverse and reciprocal regulation of VEGFR1 and VEGFR2》，

VEGF与肿瘤血管生成：

血管内皮生长因子（VEGF）是肿瘤血管生成的关键调节因子。VEGF信号对肿瘤的生长和转移至关重要，但其受体（VEGFRs）的抑制治疗在癌症患者中的效果有限。目前对VEGFR1和VEGFR2表达调控的机制了解甚少，这是这类药物的主要靶点。

研究发现，在人类鳞状细胞癌（SCC）的内皮细胞中，VEGFR1和VEGFR2的表达呈现一种相反的调控模式，与正常组织中的模式相反。

方法

组织微阵列与机制研究：

使用组织微阵列分析人类鳞状细胞癌及其对照组织（正常口腔粘膜）中VEGFR1和VEGFR2的表达。

通过Western blot、RT-PCR、real-time PCR、细胞分馏和共聚焦显微镜等技术，研究VEGF对VEGFR1和VEGFR2表达的调控机制。

采用基因沉默和功能研究，评估VEGFR1和VEGFR2信号在内皮细胞存活和毛细血管管形成中的作用。

细胞培养与处理：

使用原代人真皮微血管内皮细胞（HDMECs）和人肺内皮细胞（HPECs）进行体外实验。

通过添加不同浓度的VEGF、FBS、EGF、PlGF和IL-6等因子，观察对VEGFR1和VEGFR2表达的影响。

信号通路研究：

研究VEGF通过Akt/ERK和JNK/c-Jun信号通路对VEGFR1和VEGFR2表达的调控。

使用特定的抑制剂（如LY294002、PD98059、SP600125等）阻断这些信号通路，观察对VEGFR表达的影响。

实验

VEGFR1和VEGFR2的相反调控模式：

在人类鳞状细胞癌中，VEGFR1表达上调而VEGFR2表达下调，与正常组织相反。VEGF处理内皮细胞后，迅速上调VEGFR1并下调VEGFR2，这一过程在几分钟内完成，提示非转录水平调控。

VEGFR1主要定位于内皮细胞核内，而VEGFR2在未受刺激时位于细胞质/细胞膜，VEGF处理后转位至细胞核。

在本研究中，QA-Bio品牌的Enzymatic CarboRelease Kit（KE-DG01）：用于评估VEGFR2的糖基化状态。该试剂盒通过去除N-连接和大多数O-连接的糖链，帮助研究人员了解糖基化是否影响VEGFR2的核转位。

QA-Bio Enzymatic CarboRelease Kit的应用：

使用该试剂盒去除VEGFR2的糖链后，通过Western blot分析显示，两种VEGFR2亚型均被糖基化，但核转位的VEGFR2亚型大小较大。

这一发现表明，VEGFR2的核转位并不完全受糖基化调控，但糖基化状态可能影响其稳定性和功能。

VEGFR1和VEGFR2的功能差异：

VEGFR1信号对内皮细胞存活至关重要，而VEGFR2信号则调控毛细血管管形成。

使用shRNA介导的基因沉默技术分别下调VEGFR1和VEGFR2，发现VEGFR1下调导致内皮细胞凋亡增加，而VEGFR2下调主要影响血管形成能力。

Bevacizumab的体内外效果：

Bevacizumab（抗VEGF单抗）在体内外均能逆转肿瘤相关内皮细胞中VEGFR1和VEGFR2的表达水平，这与其抗血管生成效果相关。

结论

VEGF对VEGFR1和VEGFR2的相反调控机制：

VEGF通过复杂的信号网络精确调控VEGFR1和VEGFR2的表达，以适应微环境的变化。

VEGFR1和VEGFR2在内皮细胞中具有不同的功能和定位，VEGFR1主要调节存活，而VEGFR2调控血管生成。

Bevacizumab的潜在作用机制：

Bevacizumab的抗血管生成效果可能部分归因于其能够逆转肿瘤相关内皮细胞中VEGFR1和VEGFR2的异常表达水平。

QA-Bio Enzymatic CarboRelease Kit（KE-DG01）的价值：

该试剂盒为研究蛋白质糖基化在细胞信号传导和受体功能中的作用提供了有力工具。在本研究中，它帮助揭示了VEGFR2糖基化状态与其核转位和功能之间的关系。