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CK14 柔嫩组织研磨试剂盒助力lncRNA在心脏疾病治疗中的潜力

发布时间:2024-10-09 分享到:

心肌梗死与心脏肥大:心肌梗死后,心脏的非梗死组织会适应性改变以补偿丧失的功能组织。这种适应过程需要基因表达网络的精确调控,而这些网络主要由转录调控蛋白控制。长链非编码RNA(lncRNA)在这一过程中起着微调基因程序的作用。

核心转录因子Nkx2-5:Nkx2-5是心脏发育的核心转录因子,在胚胎期心脏发育中起关键作用。尽管Nkx2-5在成年心脏中仍表达丰富,但其在成年心脏维护和疾病中的作用尚不完全清楚。

lncRNA Swhtr的发现:研究发现了一种特异表达于心脏的心肌细胞特异性lncRNA Swhtr,它与Nkx2-5基因反向转录,但两者功能上相互独立。

Sandra等人构建了Swhtr小鼠敲除模型,研究SwhtrNkx2-5在心脏肥大中的作用,相关结果发表Nature Communications上《The lncRNA Sweetheart regulates compensatory cardiac hypertrophy after myocardial injury in murine males

Precellys.png

方法

基因工程小鼠模型:通过CRISPR/Cas9或同源重组技术在小鼠中创建Swhtr敲除模型,并构建外源性Swhtr表达拯救模型,以研究Swhtr在心脏功能中的作用。

细胞培养与缺氧处理:使用HL-1心肌细胞和原代心肌细胞进行体外实验,通过缺氧/复氧处理模拟心肌梗死后的应激条件。

组织切片培养:从成年小鼠心脏切取薄片,在体外进行缺氧/复氧处理,模拟体内心肌梗死后的应激反应,研究基因表达变化。

 

实验

1. Swhtr的表达与定位

组织特异性:通过RNA-seq和原位杂交实验证明Swhtr特异性表达于心脏组织,特别是在胚胎期心脏的流入道区域。

亚细胞定位:通过亚细胞分馏和单分子荧光原位杂交(smFISH)实验,发现Swhtr主要定位于细胞核内的染色质上,表明它可能作为顺式作用元件调控基因表达。

 

2. Swhtr在心脏发育中的作用

敲除小鼠表型:Swhtr敲除小鼠在标准饲养条件下心脏发育和功能正常,无明显表型差异。然而,在心肌梗死后,Swhtr敲除小鼠的生存率显著降低,且室间隔未出现代偿性肥大。

拯救实验:通过外源性表达Swhtr拯救了敲除小鼠在心肌梗死后的表型,表明Swhtr在心肌梗死后的心脏适应性反应中起关键作用。

 

3. Swhtr与Nkx2-5的相互作用

RNA免疫沉淀:证明Swhtr与Nkx2-5转录因子在体内外均能相互作用,且这种相互作用在缺氧条件下增强。

ChIP-seq分析:发现几乎所有Swhtr依赖的基因均被NKX2-5占据,表明Swhtr可能与Nkx2-5协同调控下游靶基因。

 

4. 组织切片培养与RNA提取

实验设计:为了模拟体内心肌梗死后的应激条件,将小鼠心脏切片在体外进行缺氧/复氧处理。处理过程中使用法国Bertin2 ml Soft Tissue Homogenizing Ceramic Beads CK14(Cat# P000912-LYSK0-A.0)组织匀浆试剂盒进行组织匀浆,以提取高质量的RNA用于后续分析。

Soft tissue homogenizing CK14(Cat# P000912-LYSK0-A.0)作用:这些陶瓷珠在匀浆过程中通过物理破碎细胞和组织,释放细胞内的RNA。由于陶瓷珠材质坚硬且耐磨,能够在不损失RNA完整性的前提下高效破碎组织。这种方法提高了RNA的提取效率和纯度,为后续的RNA-seq分析提供了可靠的材料基础。

 

结论

Swhtr在心肌梗死后心脏肥大中的作用:Swhtr是心肌梗死后心脏代偿性肥大过程中的关键调控因子。它通过与Nkx2-5协同作用,调控下游靶基因的表达,促进心脏组织的适应性肥大。

lncRNA在心脏疾病治疗中的潜力:鉴于lncRNA在心脏发育和功能调控中的重要作用,未来可以探索以lncRNA为靶点的治疗方法,为心脏疾病的治疗提供新的策略。

 

总结

本文通过一系列精心设计的实验,深入探讨了lncRNA Swhtr在心肌梗死后心脏代偿性肥大过程中的作用机制。实验中使用的Soft tissue homogenizing CK14(Cat# P000912-LYSK0-A.0)在提取高质量RNA方面发挥了重要作用,为后续的基因表达分析提供了有力支持。本研究不仅增进了我们对lncRNA在心脏发育和功能调控中作用的理解,也为心脏疾病的治疗提供了新的视角和思路。

 

Bertin其他Precellys裂解试剂盒产品详情如下:

货号

产品名称

包装

适用样品类型

0.5ml研磨Kit

P000933-LYSK0-A.0

CK14-0.5mL 柔嫩组织研磨kit

50/包

微量的柔嫩动、植物组织等

P000934-LYSK0-A.0

VK05-0.5mL 微生物研磨kit

50/包

微量的酵母菌、真菌等

2ml研磨Kit

P000910-LYSK0-A.0

MK28 坚韧组织研磨kit

50/包

坚韧的动、植物组织等,如肌肉、心脏、叶片、根须等

P000911-LYSK0-A.0

CK28 坚韧组织研磨kit

50/包

坚韧的动、植物组织等,如肌肉、心脏、叶片、根须等

P000912-LYSK0-A.0

CK14 柔嫩组织研磨kit

50/包

柔嫩的动、植物组织等,如肝脏、脑、脂肪、浆果等

P000913-LYSK0-A.0

VK05 微生物研磨kit

50/包

酵母菌、真菌等微生物

P000914-LYSK0-A.0

VK01 微生物研磨kit

50/包

细菌

P000915-LYSK0-A.0

SK38 土壤研磨kit

50/包

土壤、粪便等

P000918-LYSK0-A.0

CKMix  坚韧、柔嫩组织通用研磨kit

50/包

坚韧的动、植物组织等,如肌肉、心脏、叶片、根须等

P000919-LYSK0-A.0

CK01 细菌研磨kit

50/包

细菌

管壁加硬型2ml研磨kits(超硬管)

P000916-LYSK0-A.0

CK28-R 加强型坚韧组织匀浆kit

50/包

相当坚韧的动、植物组织等,如羽毛、皮肤、种子等

P000917-LYSK0-A.0

MK28-R 加强型坚韧组织研磨kit

50/包

相当坚韧的动、植物组织等,如羽毛、皮肤、种子等

P000922-LYSK0-A.0

CKMix50-R 超强型坚韧组织研磨kit

50/包

极其坚韧的动、植物组织等,如牙齿、骨骼、坚果等

P000923-LYSK0-A.0

CK68-R 超强型坚韧组织研磨kit

50/包

极其坚韧的动、植物组织等,如牙齿、骨骼、坚果等

P000924-LYSK0-A.0

GK60超强型坚韧组织研磨kit

50/包

极其坚韧的动、植物组织等,如牙齿、骨骼、坚果等

7ml研磨Kit

P000935-LYSK0-A.0

CK28 坚韧组织研磨kit

50/包

相当坚韧的动、植物组织等,如肌肉、心脏、叶片、根须等

P000936-LYSK0-A.0

SK38 土壤研磨kit

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土壤、粪便等

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酵母菌、真菌等微生物

P000938-LYSK0-A.0

CK01 细菌研磨kit

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细菌

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CKMix50 超强型坚韧组织研磨kit

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极其坚韧的动、植物组织等,如牙齿、骨骼、坚果等

P000940-LYSK0-A.0

CK14 柔嫩组织研磨kit

50/包

柔嫩的动、植物组织等,如肝脏、脑、脂肪、浆果等

15ml研磨Kit

P000947-LYSK0-A.0

CK28 坚韧组织研磨kit

25/包

相当坚韧的动、植物组织等,如肌肉、心脏、叶片、根须等

P000961-LYSK0-A.0

VK05坚韧微生物研磨kit

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酵母菌、真菌等微生物

P000948-LYSK0-A.0

CK01 细菌研磨kit

25/包

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CKMix50超强型坚韧组织研磨kit

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极其坚韧的动、植物组织等,如牙齿、骨骼、坚果等

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CK68 超强型坚韧组织研磨kit

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极其坚韧的动、植物组织等,如牙齿、骨骼、坚果等