TopoGEN突变型人拓扑异构酶I (Y723F)

TopoGEN现在提供了一种催化无活性的突变型人拓扑异构酶I，其纯化至均一性（SDS-PAGE上为单条带）。突变是活性位点酪氨酸（已变为苯丙氨酸）的单残基变化。该制剂在杆状病毒中过表达，并在100 kDa的SDS-PAGE上亲和纯化为单条带。该酶不能放松DNA（但仍能与DNA结合），并含有一个短的（6个残基）组氨酸标签。

作为TopoGEN在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐TopoGEN热销产品突变型人拓扑异构酶I (Y723F)。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

突变型人拓扑异构酶I (Y723F)：

SKU：TG2005H-Y723F

类别：拓扑异构酶

标签：人top1，突变人top1、top1、Topo 1、y723f

产品内容

- 10微克突变型人类拓扑异构酶I酶

- 0.5毫升10倍拓扑异构酶I反应缓冲液

这是纯化至均一的突变型人拓扑异构酶I的催化无活性形式。突变是活性位点酪氨酸（已变为苯丙氨酸）的单残基变化。该制剂在杆状病毒中过表达，在100 kDa的SDS-PAGE上作为单个条带具有亲和力（见下文SDS-PAGE数据）。该酶不能松弛DNA（见下文数据），并含有短（6个残基）组氨酸标签。

图显示了纯化突变体Top1的SDS-PAGE。琼脂糖凝胶数据清楚地表明，与野生型（WT蛋白）相比，突变体是无活性的。

酪氨酸突变型人类拓扑异构酶I质量控制测试

在最终体积为25微升的拓扑异构酶I反应缓冲液中进行松弛实验（随产品提供的10倍反应缓冲液成分：100 mM Tris-Cl，pH 7.9，1.5 M NaCl，1% BSA，1 mM精胺，50%甘油）。每个反应包含0.25微克超螺旋质粒DNA。反应用5微升（每20微升反应体积）的停止缓冲液终止（5%十二烷基硫酸钠，0.0025%溴酚蓝，25%甘油）。反应产物在1%的原生琼脂糖凝胶上进行分析。在这些条件下，即使使用高达0.5微克的突变蛋白，也检测不到松弛活性。

通过检测线性KDNA和线性质粒DNA的形成来测试核酸酶污染。在10 mM MgCl2存在下，对1微克的连环kDNA或超螺旋pUC19 DNA进行孵育（37°C下4小时）。在这些条件下，没有产生线性DNA或分解产物。

与拓扑异构酶II的交叉污染检查结果为阴性。在拓扑异构酶II反应条件下，KDNA没有发生解链。

突变型拓扑异构酶I的最终分数是柱层析池，并且处于以下缓冲液中：20mM NaH2PO4（pH7.4），300mM NaCl，500mM亚甲基。最终分数通过SDS-PAGE分析，显示含有一个单一的主要100 kDa条带。

该酶在国际上通过蓝色冰或干冰运输。将酶储存在-20°C。

美国TopoGEN创立于1991年, 专业提供拓扑异构酶试剂和分析试剂盒，他们的药物筛选试剂盒可用于鉴定拓扑异构酶靶向分子，用于癌症化疗和抗菌应用。TopoGEN还可提供检测和定量原核（DNA回旋酶，拓扑异构酶IV）和真核拓扑异构酶（拓扑异构酶I，IIa，IIb，III）的检测试剂盒，以及全系列的 DNA 底物和 DNA 切割靶标、拓扑异构酶抑制剂、拓扑异构酶抗体和试剂盒补充试剂，DNA修复的相关系列产品也是他们产品的特色产品。