近期, Michael等发表的标题为“A novel method for recombinant mammalian-expressed S-HBsAg virus-like particle production for assembly status analysis and improved anti-HBs serology”,发表在《Protein Science》期刊上,该研究介绍了一种新的方法,用于生产重组哺乳动物表达的S-HBsAg病毒样颗粒(VLPs),旨在分析组装状态并改进抗-HBs血清学。HBsAg(乙型肝炎表面抗原)是HBV(乙型肝炎病毒)唯一的脂质相关包膜蛋白,作为细胞附着和进入介质,是提供HBV免疫后中和抗体的主要靶标。尽管HBsAg在诱导保护性免疫中发挥中心作用,但缺乏比较不同HBsAg及其检测抗-HBs抗体能力的研究。此外,已建立的各种耗时复杂的HBsAg生产协议,导致结构和功能上未充分表征的HBsAg。因此,本研究提出了一种易于执行、简化和稳健的方法,通过瞬时表达在哺乳动物细胞中和从细胞裂解物中纯化,以展示表面均匀的抗原表位,以改进抗-HBs抗体的血清学检测。
方法
研究者们开发了一种在哺乳动物细胞中通过瞬时表达重组S-HBsAg VLP的方法,并从细胞裂解物中纯化,目的是在表面展示均匀的抗原表位,以改进血清学检测抗-HBs抗体。他们不仅比较了通过透射电子显微镜和质谱光度法分析的S-HBsAg和常用的HBsAg参考样本的组装状态和颗粒组成,而且还评估了它们的抗原质量和功能性,以检测抗-HBs抗体,以确定最适合于血清学筛查的样本。
实验
实验中,研究者们首先设计了S-HBsAg表达载体,使用HEK293-6E细胞系进行瞬时基因表达。通过polyethyleneimine进行转染,以表达S-HBsAg。细胞裂解后,通过亲和色谱法纯化S-HBsAg。纯化后的S-HBsAg通过NH4SCN处理形成VLPs,并通过GSH/GSSG在37°C下孵化以成熟VLPs上的表位。使用质谱光度法(MP)和透射电子显微镜(TEM)评估生产的HBsAg VLPs的组装状态,通过质量和大小进行比较。此外,通过基于珠子的多重技术,比较了S-HBsAg VLPs与血清和酵母衍生的商业HBsAg样本,以检测来自个体捐赠者以及国际抗-HBs免疫球蛋白标准和抗-HBs质量控制样本的抗-HBs抗体。
Jena Bioscience品牌的HBsAg adw1 24 kDa(货号:PR-1402)的作用和价值:
在实验中,Jena Bioscience品牌的HBsAg adw1 24 kDa(货号:PR-1402)作为一个商业对照样本,用于评估新方法生产的S-HBsAg VLPs的性能。这个样本是从酵母中提取的重组HBsAg,用于比较其在检测抗-HBs抗体方面的能力。通过比较Jena Bioscience的HBsAg与研究者们生产的S-HBsAg VLPs,可以评估新方法的有效性和潜在的改进。
Jena Bioscience的HBsAg adw1 24 kDa的价值在于它提供了一个行业标准,用于比较新开发的S-HBsAg VLPs。这种比较对于验证新方法的敏感性和特异性至关重要,因为它允许研究者们评估他们的产品在实际应用中的性能。此外,这种商业HBsAg样本的使用,也有助于理解不同生产方法对HBsAg结构和功能的影响,这对于改进疫苗和诊断工具的开发具有重要意义。
结论
研究结果表明,与酵母或血清HBsAg相比,S-HBsAg VLPs在多重血清学中检测抗-HBs抗体时显示出最高的敏感性和特异性,使其成为通过抗-HBs血清状态分析HBV免疫最适合的抗原。这项研究不仅提供了一种改进的HBsAg VLPs生产方法,而且还通过直接比较不同HBsAg样本在一种测定格式中的性能,为HBV免疫分析提供了宝贵的见解。
通过这项研究,我们可以得出结论,新方法生产的S-HBsAg VLPs在质量和功能性上都优于现有的商业HBsAg样本,包括Jena Bioscience的HBsAg adw1 24 kDa。这表明新方法有潜力改进HBV免疫分析,为未来的疫苗开发和疾病控制策略提供支持。