RARβ 荧光素酶报告基因HEK293细胞系监测RARβ的活性

视黄酸受体（RAR）属于核受体家族，有三种亚型，即RARα、RARβ和RARγ。RAR与视黄酸X受体（RXR）异二聚化，并作为转录因子调节正常和恶性细胞的生长和分化。当RAR与其配体结合，全反式视黄酸或9-顺式视黄酸时，RAR/RXR异二聚体结合到目标基因启动子区域的视黄酸反应元件，并招募共激活蛋白，导致转录和下游目标基因的表达。RARβ功能障碍可能导致宫颈癌。异常的启动子DNA高甲基化也与癌症有关。

RARβ荧光素酶报告基因HEK293细胞系是一种经过工程改造的HEK293细胞系，表达由视黄酸反应元件控制的萤火虫荧光素酶，并含有全长人类RARβ（#P10826-2）。RARβ荧光素酶报告基因HEK293细胞系旨在监测RARβ的活性。该细胞系通过全反式视黄酸（ATRA）刺激进行了功能性验证。

图1：RARγ荧光素酶报告基因HEK293细胞系的作用机制图示。在视黄酸激活后，RAR与RXR二聚化，并激活RARE和荧光素酶表达。激活水平与荧光素酶信号直接对应。

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应用：

- 监测RARβ调控的信号通路活性。

- 筛选RARβ的激动剂或拮抗剂。

细胞培养协议：

细胞解冻：

1. 在37°C水浴中旋转冷冻细胞瓶大约60秒。细胞解冻后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将瓶中的内容转移到含有10毫升预热的解冻培养基6的管中。在37°C水浴中放置细胞太久会导致活性迅速丧失。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在5毫升预热的解冻培养基6中重悬细胞。

3. 将重悬的细胞转移到T25培养瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，检查细胞附着和活力。更换为新鲜的解冻培养基6，并在37°C、5% CO2培养箱中继续培养，直到细胞准备好传代。

5. 细胞应在完全融合前传代。在第一次传代及后续传代中，使用生长培养基6A。

细胞传代：

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05% Trypsin/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基6A并转移到管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在生长培养基6A中重悬细胞。

4. 按照推荐的次培养比例1:10至1:20每周两次将细胞种植到新的培养容器中。

细胞冷冻：

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞，并用0.05% Trypsin/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1G并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在4°C细胞冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬细胞，细胞浓度约为2 x 10^6细胞/ml。

4. 将1毫升的细胞悬浮液分装到每个冷冻瓶中。将瓶子放入绝缘容器中缓慢冷却，并在-80°C下过夜保存。

5. 次日将瓶子转移到液氮中进行长期存储。

注意：建议扩展细胞并在早期传代时至少冷冻10瓶细胞以备将来使用。

图2：RARβ荧光素酶报告基因HEK293细胞系对全反式视黄酸（ATRA）的剂量反应曲线。细胞与逐渐增加的ATRA孵育。使用ONE-Step?荧光素酶检测系统测量荧光素酶活性。结果以RAR荧光素酶报告基因表达的倍数诱导显示。

文献参考：

Petkovich M., et al., 1987 Nature 330(6147): 444-450.

Allenby G., et al., 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(1): 30-34.

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