IL-23响应型STAT3荧光素酶报告基因HEK293细胞系

IL-23是由p40和p19组成的异源二聚体复合物，是一种由激活的巨噬细胞和树突状细胞产生的促炎细胞因子。这种细胞因子通过促进辅助T细胞产生干扰素-γ（IFN-γ）和支持分泌IL-17的CD4+ T细胞的增殖，在免疫反应中发挥着至关重要的作用。由于它涉及多种自身免疫疾病，包括炎症性肠病（IBD）、结肠炎、银屑病和关节炎，目前正在大力开发能够拮抗IL-23信号通路的试剂。

IL-23响应型STAT3荧光素酶报告基因HEK293细胞系是一种工程化的HEK293细胞系，表达受STAT3响应元件控制的萤火虫荧光素酶，以及人类IL-23受体复合体（IL12Rβ1 NM_005535.3 和 IL23R NM_144701.3）。利用这一细胞系，可以通过测量荧光素酶活性来监测IL-23活性。

IL-23响应型STAT3荧光素酶报告基因HEK293细胞系的功能已通过使用重组人类白细胞介素23（人类IL-23；p19 + p40）的剂量反应实验、使用抗IL-23抗体乌司他木单抗和古塞库单抗的抑制实验，以及Janus激酶抑制剂鲁索利替尼的实验进行了验证。

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应用

筛选和表征抗IL-23抗体

细胞解冻

1. 在37°C水浴中摇晃装有冷冻细胞的小瓶大约60秒。细胞解冻后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将小瓶的全部内容转移到含有10 ml预热的解冻培养基1的试管中。

注意：在37°C水浴中放置细胞过久将导致活性迅速丧失。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在5 ml预热的解冻培养基1中重悬。

3. 将重悬的细胞转移到T25培养瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换培养基为新鲜的解冻培养基1，并继续在37°C、5% CO2培养箱中培养，直到细胞准备好分裂。

5. 细胞应在完全融合前传代。在首次传代及后续传代中，使用生长培养基1U。

细胞传代

1. 抽去培养基，用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05% 胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1U并转移到试管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在生长培养基1U中重悬。

4. 按照推荐的亚培养比例1:5至1:8，每周一次或两次将细胞种入新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 抽去培养基，用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞，并用0.05% 胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1U并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在4°C冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬，细胞浓度为1~2 x 10^6个细胞/ml。

4. 将1 ml的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放入保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下保存过夜。

5. 次日将小瓶转移到液氮中长期保存。

注意：建议在早期传代时扩增细胞并至少冷冻10个小瓶以备将来使用。

图. 通过流式细胞仪分析IL-23响应型STAT3荧光素酶报告基因HEK293细胞系中IL23R和IL12Rβ1的表达。

IL-23响应型STAT3荧光素酶报告基因HEK293细胞（绿色或粉红色）或对照STAT3荧光素酶报告基因HEK293细胞（蓝色）分别用人类IL12Rβ1 PE偶联抗体（右图；R&D系统 #FAB839P）和人类IL23R PE偶联抗体（左图；R&D系统 #FAB14001P）进行细胞内染色，并通过流式细胞仪分析。Y轴代表细胞数量百分比。X轴表示PE的强度。

文献参考：

Yang K., et al., 2021 Am J Clin Dermatol. 22(2): 173-192.

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