监测IL-6（白细胞介素6）/IL-6受体相互作用的HEK293细胞系

IL-6（白细胞介素-6）在炎症发生时迅速产生，通过刺激急性期反应、造血和免疫反应，在宿主防御中发挥关键作用。IL-6通过作用于STAT3（信号转导及转录激活因子3）信号通路，对T细胞和B细胞产生刺激效应。

IL-6表达失调对慢性炎症、自身免疫和癌症具有病理效应。Il-6的表达在多个层面上受到调节，转录由多种刺激因素诱导，如TLR（Toll样受体）配体、TNFα（肿瘤坏死因子α）和ROS（活性氧）。IL-6还涉及细胞衰老，并能触发衰老引起的炎症和与年龄相关的疾病。使用抗IL-6R抗体托珠单抗在治疗RA（类风湿性关节炎）和Castleman病中取得了积极成果。因此，开发能够靶向IL-6和IL-6信号通路的分子是一个活跃的研究领域，可以作为预防和治疗慢性炎症性疾病和癌症的有效策略。

IL-6响应型荧光素酶报告基因HEK293细胞系是一种设计用于监测IL-6（白细胞介素6）/IL-6受体相互作用的HEK293细胞系。这些细胞表达内源性IL-6受体（IL-6R和gp130），并被工程化以在STAT响应元件的控制下表达萤火虫荧光素酶（图1）。

该细胞系已验证对人类白细胞介素-6（IL-6）、IL-27有反应，进一步的功能验证实验表明，IL-6诱导的荧光素酶活性可被JAK抑制剂CP 690,550和抗IL-6R中和抗体降低。

图1：IL-6响应型荧光素酶报告基因HEK293细胞系背后报告基因表达机制的示意图。

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应用

? 监测IL-6活性。

? 研究化合物对IL-6/IL-6R介导的信号通路的影响。

? 筛选抗IL-6或抗IL-6R抗体。

细胞培养协议

注意：HEK293细胞源自人类材料，因此建议采取适当的安全预防措施。

细胞解冻

1. 在37°C水浴中摇晃装有冷冻细胞的小瓶大约60秒。细胞解冻后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将小瓶的全部内容转移到含有10 ml预热的解冻培养基1的试管中。在37°C水浴中放置细胞过久将导致活性迅速丧失。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在5 ml预热的解冻培养基1中重悬。

3. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换培养基为新鲜的解冻培养基1，并继续在37°C、5% CO2培养箱中培养，直到细胞准备好传代。

5. 细胞应在完全融合前传代。在首次传代及后续传代中，使用生长培养基1N。

细胞传代

1. 抽去培养基，用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05% 胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1N并转移到试管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在生长培养基1N中重悬。

4. 按照推荐的亚培养比例1:5至1:10，每周一次或两次将细胞种入新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 抽去培养基，用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞，并用0.05% 胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1N并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在4°C冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬，细胞浓度约为1 x 10^6个细胞/ml。

4. 将1 ml的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放入保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下保存过夜。

5. 次日将小瓶转移到液氮中长期保存。

注意：建议在早期传代时扩增细胞并至少冷冻10个小瓶以备将来使用。

图：IL-6响应型荧光素酶报告基因HEK293细胞系对人类IL-27的剂量反应曲线。

IL-6响应型荧光素酶报告基因HEK293细胞与不同浓度的人类IL-27共培养过夜，并使用One-Step?荧光素酶检测系统测量荧光素酶活性。结果以荧光素酶报告基因表达的诱导倍数显示（与未刺激的细胞相比）。

文献参考：

Tanaka T., et al., 2014, Cold Spring Harb Perspect Biol. 6(10):a016295.

Choy EH., et al., 2020, Nature Rev Rheumatol. 16:335-345.

Hirano T., 2021 International Immunology 33(3):127-148.

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