BAFF/APRIL 响应型 BCMA-NF-κB 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系

B细胞成熟抗原（BCMA），也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员17（TNFRSF17）或CD269，是由TNFRSF17基因编码的I型膜蛋白。TNFRSF17是TNF受体超家族的细胞表面受体，识别其配体，包括BAFF（B细胞激活因子）和APRIL（增殖诱导配体）。BCMA在成熟的B淋巴细胞和多发性骨髓瘤（MM）细胞上优先表达。体外实验中，BCMA的激活促进B细胞的分化和增殖。BCMA诱导的信号转导涉及大量细胞内活动，包括激活NF-κB信号通路。BAFF和APRIL作为可溶性同源三聚体的生物活性区分了它们与其他TNFSF配体，如TRAIL、FasL和CD40L，后者仅作为膜结合分子活跃。

BAFF/APRIL反应性BCMA-NF-κB荧光素酶报告基因HEK293细胞系是一种HEK293细胞系，该细胞系在CMV启动子的控制下表达全长人类BCMA（B细胞成熟抗原）（NM_001192），以实现高组成表达，以及NF-κB（核因子κB）-荧光素酶报告基因。荧光素酶报告基因由位于最小启动子上游的NF-κB响应元件控制。配体结合后，BCMA将启动NF-κB信号通路，导致NF-κB控制的荧光素酶报告基因的表达。

这一细胞系已被证明对BAFF（B细胞激活因子）和APRIL（增殖诱导配体）有反应。

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应用

1、在细胞模型中监测BCMA/NF-κB信号通路活性。

2、筛选对BCMA/NF-κB信号通路有活性的化合物。

细胞培养协议

细胞复苏

1. 在37°C水浴中旋转冷冻细胞瓶大约60秒。细胞解冻后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将瓶内的全部内容转移到含有10毫升预热的解冻培养基1的管中。

注意：在37°C水浴中放置细胞过久会导致细胞活力迅速下降。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在5毫升预热的解冻培养基1中重悬细胞。

3. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，检查细胞附着和活力。更换为新鲜的解冻培养基1，并继续在37°C、5% CO2培养箱中培养，直到细胞准备好传代。

5. 在细胞完全融合之前应进行传代。在第一次传代及后续传代中，使用生长培养基1A。

细胞传代

1. 吸去培养基，用不含Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 用0.05%胰蛋白酶/EDTA处理细胞，直至细胞脱落所需的最短时间（大约30秒至1分钟）。使用显微镜确认细胞脱落。

3. 一旦细胞脱落，加入生长培养基1A并转移到管中。

4. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在生长培养基1A中重悬细胞。

5. 按推荐的亚培养比例1:6至1:10每周一次或两次播种到新的培养容器中。

注意：解冻后和在低密度时，细胞可能生长速度较慢。建议在培养初期以大约1:4的比例分离细胞。经过几次传代后，细胞生长速度增加，可以以更高的比例分离细胞。

细胞冷冻

1. 吸去培养基，用不含Ca2+/Mg2+的PBS洗涤细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞脱落，加入生长培养基1A并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在4°C细胞冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬细胞，浓度约为2 x 10^6细胞/毫升。

4. 将1毫升细胞悬浮液分装到每个冷冻管中。将管放入绝缘容器中缓慢冷却，并在-80°C下过夜储存。

注意：建议在早期传代扩展细胞并至少冷冻10管细胞以备将来使用。

图1：流式细胞仪分析BAFF/APRIL反应性BCMA NF-κB HEK293细胞系中BCMA细胞表面表达。

BAFF/APRIL反应性BCMA NF-κB-HEK293细胞（绿色）和对照亲本NF-κB-HEK293细胞（蓝色）用PE抗人CD269（BCMA）抗体（Biolegend #357503）染色，并通过流式细胞仪分析。Y轴表示细胞数量百分比。X轴表示PE强度。

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