Cayman Chemical 天冬氨酸氨基转移酶（AST）比色活性测定试剂盒

Cayman的天冬氨酸氨基转移酶（AST）比色活性测定试剂盒提供了一种方便的方法，用于在血清、血浆、组织样本和细胞裂解液中检测AST活性。通过监测与苹果酸脱氢酶（MDH）耦联的反应系统中NADH氧化的速率来测量AST活性。NADH氧化成NAD+伴随着在340纳米处吸光度的降低。在AST活性速率成为限制性条件的情况下，吸光度降低的速率与样本中的AST活性直接成比例。添加了乳酸脱氢酶（LDH）以防止血清中通常存在的内源性丙酮酸的干扰。

需要但未提供的：请下载试剂盒手册，以验证是否需要超纯水（Milli-Q或等效物）或该测定的其他任何组分。

警告：本品不适用于人类或兽医用途。

测定方案：

艾美捷Cayman的天冬氨酸转氨酶比色活性测定试剂盒（#701640-96），用于在血清、血浆、组织样本和细胞裂解液中检测AST活性。通过监测与苹果酸脱氢酶（MDH）耦联的反应系统中NADH氧化的速率来测量AST活性。NADH氧化成NAD?伴随着在340纳米处吸光度的降低。在AST活性速率成为限制性条件的情况下，吸光度降低的速率与样本中的AST活性直接成比例。添加了乳酸脱氢酶（LDH）以防止血清中通常存在的内源性丙酮酸的干扰。

样本准备：

血浆

通常，正常人血浆中的AST浓度范围为8-40 U/L。

1. 使用肝素或柠檬酸等抗凝剂采集血液。

2. 在4℃下，以700-1000g的速度离心血液10分钟。用移液管取上层黄色血浆层，不要扰动白色纤维层。将血浆存放在冰上。如果不在同一天进行测定，存放在-80℃。避免反复冻融。

3. 血浆在测定前不需要稀释。

血清

通常，正常人血清中的AST浓度范围为8-40 U/L。

1. 采集血液时不使用肝素或柠檬酸等抗凝剂。

2. 让血液在25℃下凝固30分钟。

3. 在4℃下，以2000g的速度离心血液15分钟。用移液管取上层黄色血清层，不要扰动白色纤维层。将血清存放在冰上。如果不在同一天进行测定，存放在-80℃。避免反复冻融。

4. 血清在测定前不需要稀释。

组织匀浆

1. 在解剖前，用pH 7.4的PBS溶液冲洗组织，以去除任何红细胞和凝块。

2. 每克组织用5-10毫升冷缓冲液（例如，100 mM Tris，pH 7.8）匀浆。

3. 在4℃下，以10000g的速度离心10分钟。

4. 取上清液存放在冰上。如果不在同一天进行测定，将样本存放在-20℃。

注意：如果340纳米波长处吸光度降低的速率（A340）大于0.4吸光单位/分钟，需要用测定缓冲液（1X）稀释样本以落在测定的线性范围内。

细胞裂解液

1. 通过离心（例如，在4℃下，以1000-2000g的速度离心10分钟）收集细胞（约5×10^5个）。对于贴壁细胞，使用橡胶警察而不是蛋白水解酶。

2. 在0.5-1.0毫升冷缓冲液（例如，100 mM Tris，pH 7.5，1 mM EDTA）中匀浆细胞沉淀物。

3. 在4℃下，以10000g的速度离心10分钟。

4. 取上清液存放在冰上。如果不在同一天进行测定，将样本冷冻在-80℃。

注意：如果A340降低的速率大于0.4吸光单位/分钟，需要用测定缓冲液（1X）稀释样本以落在测定的线性范围内。

添加和恢复

人血清样本中添加了AST，并使用天门冬氨酸氨基转移酶比色活性测定试剂盒进行分析。结果如下。

图. 人血清中的添加和恢复

天冬氨酸转氨酶比色活性测定试剂盒文献参考：

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6.Torruellas,C,French,S.W,Medici,V.Diagnosis of alcoholic liver disease.World J.Gastroenterol 20(33).11684-11699(2014).