抗PDR 8| ABC转运蛋白G家族成员36

PDR8蛋白是控制防御反应中细胞死亡程度的关键因素。替代名称：ABC转运蛋白ABCG.36、AtABCG36、多效耐药蛋白8、蛋白渗透3

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抗PDR 8| ABC转运蛋白G家族成员36：

免疫原: 与KLH偶联的合成肽，来源于拟南芥PDR8，UniProt编号：Q9XIE2，TAIR编号：At1g59870

宿主: 兔

克隆性: 多克隆

纯度: 血清

形式: 冻干

数量: 50 ?l

复溶: 复溶时，加入50 ?l的无菌水.

保存: 冻干/复溶后保存于-20°C；复溶后分装以避免反复冻融。请记得在打开试管前短暂离心，以避免材料粘附在试管盖或侧壁而导致损失.

测试应用: Western blot (WB)

推荐稀释度: 1 : 10000 (WB)

预期 | 表观分子量: 165 | 150 kDa（拟南芥）

确认反应性: 拟南芥

预测反应性: 油菜、盐芥

不反应于: 小麦属植物

样品: 根据文献(1)从8天大的拟南芥幼苗中提取总蛋白(T)或微粒体蛋白组分(M/P100)。幼苗基因型包括Col-0（野生型）和PEN3-GFP/pen3-1，其中pen3-1为敲低突变体(2)。请注意，PEN3也被称为PDR8或ABCG36；PDR8/PEN3/ABCG36的预期表观分子量为165 kD，PDR8/PEN3-GFP为192 kD。37 ?g的蛋白在65°C下变性5分钟，然后在8% SDS-PAGE上分离，并通过槽式转移系统以50V转至硝酸纤维素膜（0.45 ?m）上70分钟。用PBS+0.1% Tween 20（PBS-T）+5%牛奶在室温下振荡封闭印迹1小时。用1:10000稀释的一抗αPDR8（Agrisera, AS22 4846）在PBS-T+5%牛奶中4°C下过夜孵育。倒掉一抗溶液，用PBS-T在室温下振荡洗涤五次，每次5分钟。然后用二抗山羊抗兔IgG H&L（Agrisera, AS09602）稀释至1:25000孵育1小时，并用PBS-T振荡洗涤四次，每次5分钟。用化学发光检测试剂显色，曝光时间为指示的秒数。总蛋白染色Ponceau S和针对细胞质MPK6的抗体作为上样对照.

实验验证

实验验证: 在本实验中，使用Col-0（野生型）和PEN3-GFP/pen3-1验证了PDR8蛋白的检测，其中pen3-1为敲低突变体。请注意，PEN3也被称为PDR8或ABCG36；PDR8/PEN3/ABCG36的预期表观分子量为165 kD，PEN3-GFP为192 kD.

致谢: 密苏里大学哥伦比亚分校生物化学系、跨学科植物小组（IPG）的Eric Fritschi、Nga Nguyen和Antje Heese提供

参考文献:

LaMontagne ED, Collins CA, Peck SC, Heese A. 从拟南芥中分离微粒体膜蛋白. CurrProtocPlant Biol. 2016年5月；1(1):217-234. doi: 10.1002/cppb.20020. PMID: 31725992.

Lu等. (2015) 突变等位基因特异性解耦PENETRATION3功能揭示ATP结合盒转运蛋白参与不同的色氨酸代谢途径. Plant Physiol. 168 (3): 814–827.

附加信息（应用）: 蛋白或膜样品在上样前应在不超过65°C - 70°C的温度下处理10分钟.

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