孕烯醇酮ELISA试剂盒定量测定人血清中孕烯醇酮

孕烯醇酮ELISA试剂盒：用于直接定量测定人血清中孕烯醇酮的酶免疫分析。

艾美捷孕烯醇酮ELISA试剂盒：

货号：KA1912

检测下限：0.05 ng/mL

适用样本：血清

样本体积：50 ?L

标记：HRP结合物

检测方法：比色法

监管状态：仅供研究使用（RUO）

应用：定量

储存说明：将试剂盒储存于4℃。

仅供研究使用（RUO）

孕烯醇酮ELISA试剂盒检测原理：

未标记抗原（存在于标准品、对照品和样本中）与酶标记抗原（结合物）之间竞争有限数量的抗体结合位点，这些位点位于微孔板上。洗涤和倾倒步骤可去除未结合的物质。洗涤步骤后，加入酶底物。通过加入终止液来终止酶促反应。在微孔板读数器上测量吸光度。形成的颜色强度与样本中孕烯醇酮的浓度成反比。使用一系列标准品绘制标准曲线，可直接从该曲线读取样本和对照品中孕烯醇酮的浓度。

储存说明：

将整套试剂盒储存在2-8℃。在这些条件下，未开封的试剂瓶或标签所示的试剂盒在12个月内稳定。标准品和对照品：一旦打开，标准品应在14天内使用，或分装后冷冻保存。避免多次冻融循环。

所需材料但未提供

? 精确移液器，用于分取50、100、150和300 ?L

? 一次性移液枪头

? 蒸馏水或去离子水

? 振荡器

? 具有450 nm滤光片和3.0或更高上限吸光度（OD）的微孔板读数器（见测定步骤10）。

试剂准备：

? 洗涤缓冲液浓缩液（10x）

使用前用蒸馏水或去离子水稀释1:10。如果整个板都将使用，将50 mL洗涤缓冲液浓缩液稀释在450 mL水中。

? 孕烯醇酮-辣根过氧化物酶（HRP）结合物浓缩液（50x）

使用前用测定缓冲液稀释1:50（例如，40 μL HRP加入2 mL测定缓冲液中）。如果整个板都将使用，将240 μL HRP稀释在12 mL测定缓冲液中。丢弃剩余部分。

样本准备：

? 标本收集和储存

每个重复测定需要约0.2 mL血清。将4-5 mL血液收集到适当标记的试管中，让其凝固。离心并小心移除血清层。若分析将在稍后进行，可在4℃下储存长达24小时，或在-10℃或更低温度下储存。将所有人类标本视为可能的生物危害材料，并在处理时采取适当预防措施。

? 标本预处理

本测定为直接系统；无需标本预处理。

测定步骤：

所有试剂在使用前必须达到室温。标准品、对照品和样本应进行重复测定。一旦开始操作，所有步骤应不间断完成。

准备孕烯醇酮-HRP结合物和洗涤缓冲液的工作溶液。

取出所需数量的微孔条。重新封口并将未使用的微孔条放回冰箱。

将每个标准品、对照品和样本的50 μL分别加入相应标记的微孔中，进行重复测定。

向每个微孔中加入100 μL结合物工作溶液。（推荐使用多通道移液器）。

在室温下，于振荡器（约200 rpm）上孵育1小时。

用稀释的洗涤缓冲液洗涤微孔3次，每次300 ?L/孔，并将板用力敲击在吸水纸上以确保干燥（推荐使用洗涤器）。

向每个微孔中加入150 μL TMB底物。

在室温下，于振荡器上孵育10-15分钟（或直至标准品A达到所需的OD值的深蓝色）。

与步骤7相同的时间间隔，向每个微孔中加入50 μL终止液。

KA1912 8 / 13

在加入终止液后20分钟内，用微孔板读数器在450 nm处读取吸光度。

注意：如果OD值超过检测上限，或者没有450 nm滤光片，可以使用405或415 nm滤光片替代。吸光度会较低，但这不会影响样本/对照品的结果。

标准曲线仅用于说明，不应用于计算未知量。每次进行测定时，应生成标准曲线。

孕烯醇酮ELISA试剂盒文献参考：

1. Abraham GE, et al. Radioimmunoassay of Plasma Pregnenolone, 17-hydroxy-pregnenolone and

Dehydroepiandrosterone Under Various Physiological Conditions.?J Clin Endocrinol Metab. 1973;

37(1):140–4.

2. Hill M, et al. Age Relationships and Sex Differences in Serum Levels of Pregnenolone and 17-

hydroxypregnenolone in Healthy Subjects; Clin Chem Lab Med. 1999; 37(4):439–47.

3. Robel P, et al. Biosynthesis and Assay of Neurosteroids in Rats and Mice. J Steroid Biochem Mol Biol.1995;53:355–60.