Agrisera 植物抗体-BirA (mutated/TurboID)

用TurboID标记蛋白质可以研究不同类型细胞、器官和发育阶段的蛋白质相互作用。这是Mair等人（2019）所述的接近标记实验的合适工具。TurboID实现了拟南芥蛋白质复合物和细胞类型特异性细胞器蛋白质组的接近标记。Elife。2019年9月19日；8:e47864。doi:10.7554/eLife.47864。

艾美捷BirA(突变/TurboID)：

货号：AS20-4440

免疫原：重组突变型BirA蛋白，来源于大肠杆菌，使用以下质粒生产：TurboID-His6_pET21a（质粒编号#107177）。该蛋白在载体中表达，允许生成无His6标签的非标记蛋白。

宿主：兔子

克隆性：多克隆

纯度：免疫原亲和纯化的血清，溶于pH 7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）中。

形式：冻干

数量：50 ?g

复溶：复溶时加入50 ?l无菌水。

储存：冻干品/复溶后储存于-20°C；复溶后请分装保存，避免反复冻融。打开前请短暂离心管子，以避免因物质粘附在管盖或管壁上而导致的损失。

测试应用：免疫荧光（IF）、西方印迹（WB）

推荐稀释度：1:5000（WB）

预期 | 表观分子量：35 kDa

确认的反应性：BirA（突变型/TurboID）

预测的反应性：mini TurboID

未反应的：目前尚未发现与预测反应性不符的已知例外。

应用举例：

样品信息：

1-20 ?g拟南芥野生型Col-0（阴性对照）

2-20 ?g表达POI-TurboID融合蛋白的拟南芥（独立株系1）

3-20 ?g表达POI-TurboID融合蛋白的拟南芥（独立株系2）

4-20 ?g表达POI-TurboID融合蛋白的拟南芥（独立株系3）

5-10 ng纯化的TurboID（阳性对照）

实验方法：

从拟南芥叶片材料中提取20 ?g总蛋白，提取缓冲液为稀释的HENS（25 mM HEPES，pH 7.7；1 mM EDTA；2.5% SDS），并储存于-80°C。样品在95°C下用1x蛋白上样缓冲液（0.5%十二烷基硫酸钠、0.002%溴酚蓝、10%甘油、50 mM Tris-HCl，pH 6.8）变性5分钟。样品在4-16%梯度SDS-PAGE凝胶上分离，并通过半干法转印至硝酸纤维素膜（孔径0.45 ?m），转印时间为1小时。膜在4°C下用5%脱脂奶粉（TBS-T）封闭过夜，期间不搅拌。膜在4°C下用TBS-T稀释至1:5000的一抗孵育过夜，期间不搅拌。弃去抗体溶液后，膜用TBS-T快速冲洗，随后在室温下用TBS-T洗涤三次，每次10分钟，期间搅拌。膜在室温下用AGRISE

BirA(突变/TurboID)文献参考：

Persyn et al. (2024).A Nitrogen-Specific Interactome Analysis Sheds Light on the Role of the SnRK1 and TOR Kinases in Plant Nitrogen Signaling. Mol Cell Proteomics. 100842. doi: 10.1016/j.mcpro.2024.100842.   

Liu et al. (2024). Activation of kappa opioid receptor suppresses post-traumatic osteoarthritis via sequestering STAT3 on the plasma membrane. Cell Commun Signal. 2024 Jun 18;22(1):335.doi: 10.1186/s12964-024-01709-4.  

Medica et al. (2023). Proximity-dependent mapping of the HCMV US28 interactome identifies RhoGEF signaling as a requirement for efficient viral reactivation. PLoS Pathog. 2023 Oct 2;19(10):e1011682.doi: 10.1371/journal.ppat.1011682.

Shi et al. (2023). Protocol to identify protein-protein interaction networks in Solanum tuberosum using transient TurboID-based proximity labeling. STAR Protoc. 2023 Sep 20;4(4):102577.doi: 10.1016/j.xpro.2023.102577.