人CgA ELISA试剂盒定量检测人EDTA血浆和血清样本中的嗜铬粒蛋白A

嗜铬粒蛋白A是一种49 kDa的酸性蛋白，由439个氨基酸组成，编码于第14号染色体上。嗜铬粒蛋白A在多种正常和肿瘤性内分泌组织中被发现。研究表明，循环中嗜铬粒蛋白A水平升高是神经内分泌肿瘤的标志。

本ALPCO ELISA（酶联免疫吸附测定）试剂盒用于定量检测人EDTA血浆和血清样本中的嗜铬粒蛋白A（Chromogranin A）水平。仅供研究使用，不得用于诊断程序。

艾美捷ALPCO 人CgA ELISA试剂盒【#43-CGAHU-E01】检测原理：

本ALPCO ELISA试剂盒专为定量测量人EDTA血浆或血清样本中的嗜铬粒蛋白A而设计、开发和生产。检测采用双位点“夹心”技术，使用两种选定的抗体，分别结合人嗜铬粒蛋白A的不同表位。标准品、质控品和样本直接加入包被有多克隆嗜铬粒蛋白A抗体的微孔板中。经过第一次孵育后，微孔板壁上的抗体捕获样本中的人嗜铬粒蛋白A，未结合的蛋白被洗去。然后向每个微孔中加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人嗜铬粒蛋白A单克隆抗体，形成“单克隆抗体 - 人嗜铬粒蛋白A - 多克隆抗体”的“夹心”复合物。未结合的单克隆抗体在随后的洗涤步骤中被去除。为了检测这一免疫复合物，微孔与底物溶液孵育一定时间，然后在分光光度微孔板读数仪中测量。结合在微孔壁上的免疫复合物的酶活性与样本中嗜铬粒蛋白A的量成正比。通过绘制标准品的吸光度与相应人嗜铬粒蛋白A浓度的关系，并使用四参数曲线拟合，生成标准曲线。测试样本中人嗜铬粒蛋白A的浓度直接从该标准曲线上读取。

试剂：准备与储存

本试剂盒在收到后必须在2-8℃下储存。试剂盒的有效期请参考试剂盒包装上的标签。所有组分在有效期前均稳定。

使用前请将所有试剂恢复至室温。不同批次号的试剂盒组分不应混合或互换使用。

抗CgA抗体包被微孔板

描述：包被有人嗜铬粒蛋白A抗体的微孔板。

数量：1 x 96孔微孔板

储存条件：2-8℃

CgA示踪抗体

描述：在稳定蛋白基质中的辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人嗜铬粒蛋白A单克隆抗体。

数量：1 x 12 mL

储存条件：2-8℃

CgA检测缓冲液

描述：含有牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。

数量：1 x 30 mL

储存条件：2-8℃

ELISA洗涤浓缩液

描述：含有非叠氮化物防腐剂的磷酸盐缓冲液中的表面活性剂。

数量：1 x 30 mL

储存条件：2-25℃

准备方法：30倍浓缩液。使用前需与870 mL蒸馏水混合均匀。

ELISA HRP底物

描述：含有稳定过氧化氢的四甲基联苯胺（TMB）。

数量：1 x 12 mL

储存条件：2-8℃

ELISA终止液

描述：0.5 M硫酸。

数量：1 x 12 mL

储存条件：2-25℃

嗜铬粒蛋白A标准品（1-6级）

描述：含有Proclin防腐剂的冻干牛血清白蛋白基质中的人嗜铬粒蛋白A。每瓶的具体浓度请参考标签。

数量：6 x 瓶

储存条件：2-8℃（冻干），<-20℃（复溶）

注意事项：复溶后不超过3次冻融循环。

准备方法：需用0.5 mL去离子水复溶，静置10分钟，然后通过倒置或轻柔涡旋混合微孔。确保所有固体完全溶解后使用。

嗜铬粒蛋白A质控品

描述：含有Proclin防腐剂的冻干牛血清白蛋白基质中的人嗜铬粒蛋白A。每瓶的具体浓度请参考标签。

数量：2 x 瓶

储存条件：2-8℃（冻干），<-20℃（复溶）

注意事项：复溶后不超过3次冻融循环。

准备方法：需用0.5 mL去离子水复溶，静置10分钟，然后通过倒置或轻柔涡旋混合微孔。确保所有固体完全溶解后使用。

安全注意事项：

本试剂仅供研究使用。

含牛血清白蛋白的试剂原料来源于美国本土48个州。仅从在兽医监督下饲养且未发现传染性疾病的健康供体动物中获取。

进行本检测时请佩戴手套，并将这些试剂视为可能具有传染性。

避免接触含有过氧化氢或硫酸的试剂。

不要让试剂进入眼睛、皮肤或衣物。

不要吞咽或吸入试剂的烟雾。

接触后，用大量清水冲洗至少15分钟。

使用良好的实验室操作规范。

结果解读：

质控品和样本的人嗜铬粒蛋白A浓度直接从标准曲线上读取，使用其各自的校正吸光度值。

对于高于最高检测标准90%的样本，强烈建议将样本用检测缓冲液稀释1:100后重新检测，以获得更准确的结果。例如，最高检测标准约为2,500 ng/ml，任何显示值大于2,250 ng/ml（2,500 ng/ml的90%）的样本应以1:100稀释后重新检测。如果1:100稀释的样本仍高于最高检测标准，可以选择将样本值报告为高于最高检测标准（例如>2,500 ng/ml），或者进一步测量1:10,000稀释的样本。建议获得位于标准水平2至水平4之间的稀释样本值，将该测量值乘以稀释因子以获得报告值。

示例数据与标准曲线：

展示了人嗜铬粒蛋白A ELISA的典型吸光度数据和生成的标准曲线。此曲线不应替代每次检测时运行的标准曲线。

文献参考：

1. Pirker RA, Pont J, P?hnl R, Schütz W, Griesmacher A, Müller MM. Usefulness of chromogranin

A as a marker for detection of relapses of carcinoid tumours. Clin Chem Lab Med 1998;36:837-

40.

2. Kimura N, Miura W, Noshiro T, Mizunashi K, Hanew K, Shimizu K, et al. Plasma chromogranin

A in pheochromocytoma, primary hyperparathyroidism and pituitary adenoma in comparison

with catecholamine, parathyroid hormone and pituitary hormones. Endocr J 1997;44:319-27.

3. Hendy GN, Bevan S, Mattei MG, Mouland AJ. Chromogranin A. Clin Invest Med 1995;18:47-65.

4. Deftos LJ. Chromogranin A: its role in endocrine function and as an endocrine and

neuroendocrine tumor marker. Endocrine Reviews: 1991;12:181-7

5. Sobol RE, Memoli V, Deftos LJ. Hormone-negative, chromogranin A-positive endocrine tumors.

N Engl J Med 1989;320:444-7.