阿尔茨海默病（Alzheimer's Disease, AD）是一种神经退行性疾病，其主要病理特征之一是大脑中beta-淀粉样蛋白（Amyloid-β, Aβ）的沉积。Aβ的积累被认为驱动了AD的发病过程，因此，清除Aβ成为治疗AD的一个重要目标。星形胶质细胞（Astrocytes）是中枢神经系统（CNS）中的主要胶质细胞类型，具有多种免疫效应功能，能够释放多种生长因子、细胞因子和化学趋化因子，并参与抗氧化应激和神经元保护。研究发现，星形胶质细胞能够摄取Aβ，从而有助于清除脑中的Aβ沉积。然而，关于人星形胶质细胞介导的Aβ清除机制的了解仍相对有限。特别是在胎儿和成人星形胶质细胞在Aβ摄取方面的差异，以及α1-抗胰凝乳蛋白酶（α1-Antichymotrypsin, ACT）对Aβ摄取的影响方面，尚需进一步研究
“Binding and Uptake of Ab1-42 by Primary Human Astrocytes In Vitro”旨在探讨胎儿和成人星形胶质细胞对Aβ1-42的摄取能力，并研究ACT是否会影响这一过程。研究通过流式细胞术和共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）技术，对胎儿和成人星形胶质细胞摄取FAM标记的Aβ1-42的能力进行了量化分析，并观察了ACT对Aβ1-42摄取的影响。此外，研究还评估了Aβ1-42和ACT处理对星形胶质细胞活性和炎症因子释放的影响。
实验方法
1. 细胞培养：采用人体原代胎儿和成人星形胶质细胞进行实验。胎儿星形胶质细胞在含有特定生长因子的培养基中培养。成人星形胶质细胞则从非痴呆和AD患者的死后脑组织中分离并培养。所有细胞均在无菌条件下培养，并定期更换培养基以保持细胞活力。
2. Aβ1-42与ACT的准备：Aβ1-42通过与anaspec品牌的5-(和-6)-羧基荧光素（FAM）标记的Aβ1-42混合制备荧光Aβ1-42（FluoAβ）。ACT则来源于血浆，并与FluoAβ以不同的摩尔比混合，以研究其对Aβ1-42摄取的影响。
货号 | ||
规格 | 0.1mg | 0.5mg |
名称 | β-淀粉样蛋白（1-42），FAM标记 β-Amyloid (1-42), FAM-labeled | |
序列 | FAM-DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA | |
CAS号 | 1802087-78-0 | |
图片 |
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3. 结合与摄取实验：通过流式细胞术检测星形胶质细胞对Aβ1-42的结合与摄取情况。细胞与不同浓度的Aβ1-42孵育一定时间后，收集细胞并用流式细胞仪分析荧光强度，从而量化Aβ1-42的结合与摄取。此外，还通过CLSM观察Aβ1-42在细胞内的分布和摄取情况。
4. 细胞活性与炎症因子检测：为了评估Aβ1-42和ACT对星形胶质细胞活性的影响，采用XTT试剂盒检测细胞活性。同时，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清中炎症因子单核细胞趋化蛋白-1（Monocyte Chemoattractant Protein-1, MCP-1）的水平，以评估细胞的炎症反应。
5. 蛋白质分析：通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western Blotting）分析Aβ1-42和Aβ1-42/ACT混合物的蛋白质组成。同时，通过电子显微镜观察Aβ1-42和Aβ1-42/ACT混合物的形态学特征。
实验结果
1. Aβ1-42的结合与摄取：实验结果显示，无论是胎儿还是成人星形胶质细胞，均能够结合并摄取Aβ1-42。然而，胎儿星形胶质细胞对Aβ1-42的摄取效率显著高于成人星形胶质细胞。此外，Aβ1-42的摄取量随着孵育时间和Aβ1-42浓度的增加而增加。值得注意的是，无论是来自AD患者还是非痴呆患者的成人星形胶质细胞，在Aβ1-42的摄取能力上均未见显著差异。同时，ApoE基因型也未对Aβ1-42的摄取产生显著影响。
通过流式细胞术（FACS）检测星形胶质细胞对FluoAb的摄取。（A）FluoAb处理浓度（1-20μM）与成年（n=14）和胎儿（n=3）星形胶质细胞在过夜暴露后FluoAb阳性百分比的剂量-反应关系。（B）暴露于10μM FluoAb不同时间（2小时、4小时、6小时或过夜）与胎儿（n=3）和成年（n=8）星形胶质细胞FluoAb阳性百分比的时间-反应关系。结果以平均值和标准差（须状线）表示。
2. ACT对Aβ1-42摄取的影响：尽管ACT在体外和体内均被证明能够影响Aβ的聚集和清除，但在本实验中，ACT并未显著影响人体原代星形胶质细胞对Aβ1-42的摄取。然而，ACT在一定程度上刺激了成人星形胶质细胞释放炎症因子MCP-1，而对胎儿星形胶质细胞则无此作用。这一发现可能暗示ACT在成人和胎儿星形胶质细胞中的作用机制存在差异。
3. 细胞活性与形态学观察：在长时间暴露于Aβ1-42和Aβ1-42/ACT混合物后，星形胶质细胞的活性并未受到显著影响。然而，电子显微镜观察显示Aβ1-42和Aβ1-42/ACT混合物在形态上存在差异，这可能与ACT对Aβ1-42聚集状态的影响有关。
4. 蛋白质分析：SDS-PAGE和Western Blotting结果显示Aβ1-42主要以单体和高分子量寡聚体的形式存在。在与ACT混合后，Aβ1-42的聚集状态发生变化，形成了不同大小的SDS稳定寡聚体。这些变化可能反映了ACT对Aβ1-42聚集状态的调控作用。
该研究报道了人体原代胎儿和成人星形胶质细胞对Aβ1-42的结合与摄取能力，并探讨了ACT在此过程中的作用。研究结果表明胎儿星形胶质细胞对Aβ1-42的摄取效率显著高于成人星形胶质细胞，而ACT并未显著影响Aβ1-42的摄取但刺激了成人星形胶质细胞释放炎症因子MCP-1。这些发现为深入理解Aβ在人体内的清除机制提供了新的视角，并为AD的治疗提供了新的思路。
在神经退行性疾病，尤其是阿尔茨海默病（Alzheimer's Disease, AD）的研究中，β-淀粉样蛋白（Amyloid-β，Aβ）是淀粉样斑块的主要成分，在AD患者的大脑神经元中积累。从AD大脑中分离出的淀粉样肽的生物化学分析表明，Aβ(1-42)是与老年斑淀粉样蛋白相关的主要种类,anaspec作为多肽生产专家，可以提供多种Aβ(1-42)：
货号 | 名称 |
AS-20276 | β-Amyloid (1-42) - 1 mg |
AS-20276-25 | β-Amyloid (1-42) - 25 mg |
AS-20276-5 | β-Amyloid (1-42) - 5 mg |
AS-21791 | β-Amyloid (1-42) ? HCl - 0.5 mg |
AS-21793 | β-Amyloid (1-42) ? HCl - 1 mg |
AS-23523-05 | Biotin-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-23524-01 | Biotin-β-Amyloid (1-42) - 0.1 mg |
AS-23537 | Cys-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-23538 | Cys-β-Amyloid (1-42) - 1 mg |
AS-24224- | β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-24640 | Biotin-LC-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-24641-01 | Biotin-LC-β-Amyloid (1-42) - 0.1 mg |
AS-25231 | β-Amyloid Peptide (1-42), mouse, rat - 1 mg |
AS-25381 | β-Amyloid Peptide (1-42), mouse, rat - 0.5 mg |
AS-25382 | Scrambled-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-25383 | Scrambled-β-Amyloid (1-42) - 1 mg |
AS-29903-01 | [Pyr11]-β-Amyloid (11-42) - 0.1 mg |
AS-29903-1 | [Pyr11]-β-Amyloid (11-42) - 1 mg |
AS-60476 | β-Amyloid (1-42), TAMRA-labeled - 0.1 mg |
AS-60479-01 | β-Amyloid (1-42), HiLyte? Fluor 488-labeled - 0.1 mg |
AS-60480-01 | β-Amyloid (1-42), HiLyte? Fluor 555-labeled - 0.1 mg |
AS-60883 | β-Amyloid (1-42), sodium salt - 1 mg |
AS-60883-01 | β-Amyloid (1-42), sodium salt - 0.1 mg |
AS-60892 | β-Amyloid (1-42), Scrambled, 5-FAM labeled - 0.1 mg |
AS-61226-05 | GIP (1-42), human - 0.5 mg |
AS-61226-1 | GIP (1-42), human - 1 mg |
AS-61484-01 | β-Amyloid (1-42)-Lys(Biotin)-NH2 - 0.1 mg |
AS-61484-05 | β-Amyloid (1-42)-Lys(Biotin)-NH2 - 0.5 mg |
AS-61967-05 | [Gly22]-β-Amyloid (1-42), Arctic Mutation - 0.5 mg |
AS-62142 | [Gln22]-β-Amyloid (1-42), Dutch mutation - 0.5 mg |
AS-62148 | [Lys22]-β-Amyloid (1-42), Italian Mutation - 0.5 mg |
AS-62478 | [Met(O)35]-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-63317- | β-Amyloid (11-42) - 1 mg |
AS-63323 | [Arg6]-β-Amyloid (1-42), English Mutation - 0.5 mg |
AS-63324 | [Asn7]-β-Amyloid (1-42), Tottori-Japanese Mutation - 0.5 mg |
AS-63327 | β-Amyloid (11-42), HiLyte? Fluor 488-labeled - 0.1 mg |
AS-63672-05 | [Cys26]-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-63672-1 | [Cys26]-β-Amyloid (1-42) - 1 mg |
AS-63704 | [Gly21]-β-Amyloid (1-42), Dutch Mutation - 0.5 mg |
AS-63705 | [Asn23]-β-amyloid (1-42), Iowa Mutation - 0.5 mg |
AS-63738 | ClearPoint? β-Amyloid (1-42), 13C, 15N-labeled at Arg & Lys - 50 ?g |
AS-64129-05 | β-Amyloid (1-42) ? HFIP - 0.5 mg |
AS-64129-1 | β-Amyloid (1-42) ? HFIP - 1 mg |
AS-64161 | β-Amyloid (1-42), HiLyte? Fluor 647-labeled - 0.1 mg |
AS-64519 | [Met]-β-Amyloid (1-42), 5-TAMRA labeled - 0.1 mg |
AS-65178 | [Pro19]-β-Amyloid (1-42) - 1 mg |
AS-72216 | AggreSure β-Amyloid (1-42), human - 0.25 mg |
AS-65627 | ?-Amyloid (1-42), HiLexa? Fluor 488-labeled - 0.1 mg |
AS-65662 | GIP (1-42)-acetate, human - 0.1 mg |
AS-GMP-20276-1 | GMP β-Amyloid (1-42), human - 1 mg NET |
AS-GMP-20276-5 | GMP β-Amyloid (1-42), Human - 5 mg NET |
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