丙型肝炎病毒（HCV）属于黄病毒科（Flaviviridae），HCV基因组为9.6 kb的正链RNA，编码一个长约3000个氨基酸的多聚蛋白前体。该多聚蛋白在翻译过程中通过宿主细胞和病毒蛋白酶的蛋白水解作用被加工成至少10种独立的蛋白质，包括4种结构蛋白（C、E1、E2和p7）和6种非结构（NS）蛋白（NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B）。NS3蛋白是一种多功能蛋白，其N端三分之一为丝氨酸蛋白酶结构域，C端三分之二为解旋酶结构域。NS3-4A丝氨酸蛋白酶是由两种HCV编码蛋白形成的非共价异二聚体复合物，即NS3的N端丝氨酸蛋白酶结构域（催化亚单位）和NS4A辅助因子（激活亚单位）。NS3-4A丝氨酸蛋白酶负责HCV多聚蛋白前体在四个连接位点的蛋白水解切割：NS3/NS4A（自身切割）、NS4A/NS4B、NS4B/NS5A和NS5A/NS5B。由于这些切割过程对于病毒蛋白的成熟至关重要，因此抑制NS3/4A蛋白酶被认为是开发高效抗HCV药物的重要靶点之一。
SensoLyte 520 HCV蛋白酶检测试剂盒（货号AS-71145）可用于高通量筛选HCV NS3/4A蛋白酶抑制剂，并通过5-FAM/QXL?520荧光共振能量转移（FRET）肽定量检测HCV NS3/4A蛋白酶活性。这种FRET肽的序列源自NS4A/NS4B的切割位点。在FRET肽中，5-FAM的荧光被QXL?520猝灭。当被HCV NS3/4A蛋白酶切割成两个独立片段时，5-FAM的荧光得以恢复，并可在激发波长/发射波长为490 nm/520 nm处进行监测。由于具有更高的荧光量子产率和更长的波长，5-FAM的信号受细胞成分和测试化合物自身荧光的干扰较小。该检测方法能够检测到低至1.56 ng/mL的活性HCV NS3/4A蛋白酶。
货号 | |
名称 | SensoLyte520 HCV Protease Assay HCV 蛋白酶检测试剂盒 |
应用 | 1. 生物样品中HCV NS3/4A蛋白酶活性测定； 2. 使用纯化的HCV NS3/4A蛋白酶筛选蛋白酶抑制剂； |
除了可提供高质量的HCV NS3/4A蛋白酶分析试剂盒，AnaSpec还可以提供HCV NS3/4A蛋白酶抑制剂，HCV NS3/4A蛋白酶底物等：
货号 | 名称 | 应用 |
AS-60798 | HCV NS3/4A Protease Substrate HCV NS3/4A蛋白酶底物 | 一种检测丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶活性的高灵敏度FRET底物。检测HCV NS3/4A蛋白酶< 0.1pmol。裂解后，可以在Abs/Em = 490/512 nm处监测荧光。 |
AS-22991 | HCV Protease FRET Substrate HCV蛋白酶FRET底物 | 广泛用于NS3蛋白酶活性的连续检测。底物的切割与酶浓度成正比，NS3的检测限在1 nM到250 pM之间。在该底物被切割后，可以在吸收/发射波长为355/500 nm处监测荧光。 |
AS-25346 | HCV NS3 Protease Inhibitor 2 HCV NS3蛋白酶抑制剂2 | 一种强效的丙型肝炎病毒NS3蛋白酶肽抑制剂。 |
AS-71126 | SensoLyte490 HCV Protease Assay kit HCV 蛋白酶检测试剂盒 | 可用于高通量筛选HCV NS3/4A蛋白酶抑制剂，并通过荧光共振能量转移（FRET）肽连续定量检测HCV NS3/4A蛋白酶活性。这种FRET肽的序列源自NS4A/NS4B的切割位点。在自然切割位点上的半胱氨酸被氨基丁酸（Abu）取代，且可切割的酰胺键被酯键取代。这些修饰使kcat/Km值提高了100倍以上，并能够检测到亚纳摩尔浓度的NS3/4A蛋白酶活性。在FRET肽中，EDANS的荧光被DABCYL猝灭。当HCV NS3/4A蛋白酶在Abu-Ala位点将肽切割成两个独立片段时，EDANS的荧光得以恢复，并可在激发波长/发射波长为340 nm/490 nm处进行监测。该检测方法能够检测到低至25 ng/mL的活性HCV NS3/4A蛋白酶。 |
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