总唾液酸检测试剂盒测量生物样本中总唾液酸的含量

至少有43种含有N-或O-取代的衍生物，其中最常见的衍生物是N-乙酰神经氨酸（NANA或Neu5Ac）。虽然在正常人血清中已检测到毫摩尔浓度的唾液酸，但细胞内含量最高的唾液酸存在于大脑神经节苷脂中，这些神经节苷脂在神经传递、记忆存储以及突触形成中发挥作用。此外，富含唾液酸的蛋白质（称为唾液酸糖蛋白）可以结合细胞黏附分子选择素（Selectin）。在转移性癌细胞表面积累的唾液酸糖蛋白会导致细胞表面负电荷显著增加，从而排斥其他细胞，并促进癌细胞进入血液。严重的常染色体隐性神经退行性疾病——唾液酸贮积症（SSDs），是由唾液酸跨溶酶体膜运输缺陷引起的，导致唾液酸在组织、成纤维细胞和尿液中积累。这种运输缺陷可以通过定量尿液中游离唾液酸来检测。此外，某些病毒和细菌利用唾液酸进行宿主结合和识别。例如，所有流感A病毒株都需要唾液酸才能与细胞结合。当流感A病毒结合细胞表面的唾液酸受体时，细胞会内化病毒，从而导致细胞感染。

Cell BioLabs的总唾液酸检测试剂盒是一种简单的比色法检测方法，可在96孔微孔板格式中测量生物样本中总唾液酸的含量。

每个试剂盒提供足够的试剂进行多达100次检测（包括空白、唾液酸标准品和未知样本）。通过与已知浓度的唾液酸标准品进行比较，确定样本中的唾液酸浓度。该试剂盒的检测灵敏度下限为6.25 ?M唾液酸。

注意：每个样本重复需要2次检测，一次用唾液酸醛缩酶处理（+SAA），一次不处理（-SAA）。唾液酸的计算基于两个孔的吸光度（OD）读数差异。

作为Cell Biolabs全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Cell Biolabs热销产品唾液酸总量测定试剂盒(比色法)。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

检测原理

Cell BioLabs的总唾液酸检测试剂盒用于测量生物样本中的总唾液酸。唾液酸与蛋白质和其他分子结合后，首先通过神经氨酸酶处理转化为游离形式。然后在唾液酸醛缩酶存在的情况下，唾液酸被转化为丙酮酸。最后，在磷酸和氧气存在的情况下，丙酮酸被丙酮酸氧化酶氧化为乙酰磷酸、二氧化碳和过氧化氢。生成的过氧化氢通过高特异性的比色探针进行检测。辣根过氧化物酶催化探针与过氧化氢之间的反应，二者以1:1的比例结合。样本和标准品在96孔微孔板格式中进行比较，孵育30分钟后，使用标准96孔比色板读数器读取结果（见图1）。

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试剂盒组成

盒子1（蓝色冰袋运输）  

1. 唾液酸标准品（部件号50151C）：1管50 ?L的N-乙酰神经氨酸，浓度为160 mM。  

2. 比色探针（部件号50222C）：1管50 ?L，溶于DMSO。  

3. 辣根过氧化物酶（HRP）（部件号234402-T）：1管10 ?L，浓度为100 U/mL，溶于甘油。  

4. FAD（部件号50293C）：1管50 ?L，浓度为2 mM的黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）。  

5. TPP（部件号50294C）：1管50 ?L，浓度为2 mM的硫胺素焦磷酸（TPP）。  

6. 神经氨酸酶（部件号51562D）：1管300 ?L。  

7. 唾液酸醛缩酶（部件号51563D）：1管500 ?L。  

8. 丙酮酸氧化酶（部件号50295C）：1管300 ?L。  

盒子2（蓝色冰袋运输）  

1. 10倍检测缓冲液（部件号50292A）：1瓶25 mL。  

2. 10倍反应缓冲液（部件号51561A）：1管1.4 mL。  

未提供材料

1. 蒸馏水或去离子水  

2. 10 kDa分子量截留（MWCO）离心过滤器（例如Amicon Ultra 0.5 mL）  

3. 磷酸盐缓冲液（PBS）  

4. 标准96孔透明微孔板和/或透明细胞培养微孔板  

储存条件

收到试剂盒后，将10倍反应缓冲液和10倍检测缓冲液储存在4℃。将神经氨酸酶和唾液酸醛缩酶储存在-80℃。将其他所有组分储存在-20℃或-80℃。比色探针对光敏感，必须妥善保存。避免多次冻融循环。

结果示例：

下图显示了典型的总唾液酸检测试剂盒结果。应该使用数据以下仅供参考。这些数据不应用于解释或计算实际的样本结果。

文献参考：

1. Wang B, Miller JB, McNeil Y, and McVeagh P (1998). Comp. Biochem. Physiol. 119A: 435-439.

2. Votyakova TV, and Reynolds IJ (2001) Neurochem. 79:266.

3. Hangloo VK, Kaul I, and Zargar HR (1990) J. Postgrad. Med. 36: 140-142.

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7. Mandal C and Mandal C (1990) Cell. Mol. Life Sci.46:433-441.

8. Wang B. (2012) Adv Nutr. 3: 465S–472S.

Cell Biolabs公司位于美国加利福尼亚州南部重要的工业城市圣迭戈（San Diego），是有名的细胞学试剂品牌，作为前沿的细胞学分析检测试剂盒生产商，为生物技术和研究类客户提供好的基于细胞功能研究以及疾病等方面的高端产品和技术服务。产品主要涵盖细胞研究、细胞信号通路和蛋白质生物学、代谢研究、病原体和毒素、干细胞研究等领域。全球众多大学、政府研究机构、生物、制药企业的科研实验室均在使用Cell Biolabs的产品。