H3K27去甲基化酶检测：JMJD3/UTX 去甲基酶活性/抑制测定试剂盒

赖氨酸组蛋白甲基化是最强大的表观遗传标记之一，对于多个细胞过程的调节至关重要。H3-K27 的甲基化似乎特别重要，因为它与基因组的抑制区有关。H3-K27 甲基化被认为是不可逆的，直到鉴定出大量组蛋白去甲基化酶表明去甲基化事件在组蛋白修饰动力学中起重要作用。到目前为止，已经鉴定出至少 2 类 H3-K27 特异性组蛋白去甲基化酶，即 JMJD3 （KDM6B） 和 UTX （KDM6A）。JMJD3 和 UTX 可以去除 H3-K27 中的二甲基化和三甲基化。JMJD3 和 UTX 去甲基化酶是包含 JmjC 结构域的蛋白质，通过使用羟基化反应和所需的铁和 a-酮戊二酸作为辅因子来催化甲基化的去除。

发现 JMJD3 和 UTX 去甲基化酶具有潜在的致癌功能。例如，JMJD3 在前列腺癌中扩增，而 UTX 突变在多种癌症类型中发现，包括肾癌和多发性骨髓瘤。检测 JMJD3/UTX 的活性和抑制对于阐明基因激活和沉默的表观遗传调控机制非常重要，并有利于癌症诊断和治疗。

原理和程序

表观酶 JMJD3/UTX去甲基化酶活性/抑制检测试剂盒（比色法）包含了测量JMJD3/UTX活性/抑制所需的所有试剂。在该测定中，三甲基化组蛋白 H3-K27 底物稳定包被到条带孔上。活性 JMJD3/UTX 与底物结合并从底物中去除甲基。JMJD3/UTX 去甲基化产物可以用特异性抗体识别。然后可以通过读取酶标仪中的吸光度密度 （OD） 来比色测量与酶活性成正比的去甲基化产物的比率或量。JMJD3/UTX 酶的活性与测量的 OD 强度成正比。

表观酶 JMJD3/UTX 去甲基化酶活性/抑制检测试剂盒（比色法）是一整套优化试剂，设计用于使用来自多种物种（如哺乳动物、植物、真菌和细菌）的核提取物或纯化酶测量 JMJD3 和 UTX 的活性/抑制，形式包括但不限于培养细胞和新鲜和冷冻组织。目前用于检测 JMJD3/UTX 活性/抑制的方法数量有限。传统方法基于甲醛释放量的测量，甲醛释放是 JMJD3/UTX 酶促反应的副产物，并且具有明显的弱点：

（1） 需要大量（μg 级）底物和酶;

（2） 不能使用细胞/组织的细胞核提取物;

（3） 氧化还原敏感的 JMJD3/UTX 抑制剂不适合用这种方法进行测试;

（4） SDS、DMSO、含巯基的化学品和离子的高介入性，这些化合物通常包含在酶溶液、测试化合物溶剂和检测缓冲液中;

（5） 不如直接测量 JMJD3/UTX 转化的去甲基化产物准确。

表观酶? JMJD3/UTX 去甲基酶活性/抑制检测试剂盒解决了这些问题，具有以下优势：

• 使用 96 Stripwell 微孔板规格进行 3 小时比色程序，可进行手动或高通量分析。

• 通过直接检测 JMJD3/UTX 转化的去甲基化产物（而不是副产物），直接测量 JMJD3 或 UTX 活性，从而消除由含巯基的化学物质（如 DTT、GSH 和 2-巯基乙醇）或由去污剂/离子（如 tween-20、SDS、triton X-100、Fe 和 Na）引起的检测干扰。

• 含有 JMJD3/UTX 去甲基化酶和纯化的 JMJD3 或 UTX 蛋白的细胞/组织提取物均可使用，这允许在体内和体外检测 JMJD3/UTX 抑制剂的抑制作用。

• 灵敏度比基于甲醛释放的 JMJD3/UTX 检测高 200 倍，可从低至 10 ng 的纯化 JMJD3 和 UTX 酶中检测到活性。

• 包括去甲基化的 H3-K27 标准品，可以定量 JMJD3/UTX 的比活性。

• 准确、可靠，并与极低的背景信号保持一致。

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