流式细胞术的荧光偶联物

流式细胞术是一种强大的技术，用于测量和分析单个颗粒在溶液中通过光束时的物理特性。可以测量诸如相对大小和荧光等属性，而荧光标记的抗体则能够使细胞被检测出多种蛋白质和分子动态。流式细胞术能够对细胞群体进行快速的多参数分析，这在生物医学研究中非常有用。通过使用特定荧光标记的抗体，研究人员可以同时检测细胞表面的多个抗原，从而了解细胞的表型和功能。此外，流式细胞术还可以用于监测细胞内信号传导途径的活性，以及细胞周期的不同阶段。

复习：二抗格式

- 全分子IgG抗体：是常见的二抗形式，能够与一抗的Fc区结合。

- F(ab')2片段抗体：由IgG经蛋白酶处理得到，包含两个Fab臂，但没有Fc区。在染色组织或细胞时，由于缺乏Fc区，可以避免因细胞表面表达的Fc受体导致的非特异性结合背景。

- FabuLight - Fc特异性Fab片段抗体：通过木瓜蛋白酶消化IgG并去除Fc片段制成。这些单价Fab片段特异性针对一抗的Fc区，不会与一抗的抗原结合区发生相互作用。偶联的FabuLight 可用于在与实验样本孵育前对一抗进行标记，节省孵育和洗涤步骤，同时像F(ab')2片段一样，能够通过防止Fc受体结合来减少背景染色。

流式细胞术的荧光偶联物

Jackson ImmunoResearch提供多种荧光染料偶联的二抗，这些荧光染料涵盖从紫外到远红的整个光谱范围，可根据仪器的能力进行选择。包括Alexa Fluor、Brilliant Violet、Cyanine，以及三种大型明亮的荧光蛋白（R-PE、APC和PerCP），可设计出满足仪器能力和实验需求的流式细胞术染料组合。

实验对照

对照对于验证实验和解释结果至关重要。ChromPure 蛋白从非免疫动物的血清中纯化，是适当的实验对照。同种型对照是一种阴性对照，可用于估计抗体的非特异性结合。同种型对照是与实验中使用的抗体的宿主物种和类别相匹配的抗体，但不针对感兴趣的抗原。同种型对照应与特异性抗体一样，用相同的报告分子偶联。

间接流式细胞术

在流式细胞术中，直接法通常是指将荧光染料直接偶联到一抗上，而间接法则是使用荧光标记的二抗来识别未标记的一抗。间接法的优势在于可以通过二抗放大信号，从而提高检测的灵敏度，这在检测低丰度或弱表达的抗原时特别有用。图1中的数据清楚地展示了间接法在信号强度上的优势，这对于需要高灵敏度检测的实验来说是一个重要的考量因素。此外，间接法还允许使用同一二抗与多种一抗结合，增加了实验设计的灵活性。不过，间接法也可能带来更高的背景噪音，因此选择合适的二抗和对照对于获得准确结果至关重要。

 直接和间接流式细胞术方法的比较

在用氯化铵裂解红细胞后，对人类外周血门控淋巴细胞进行CD3表达分析，使用了直接或间接流式细胞术。比较平均荧光强度显示，间接方法产生的信号更亮（22,973），相比于直接方法（8,985）。（实验在BD FACSCelesta上执行）。

产品举例：

Jackson ImmunoResearch 提供的二抗产品在流式细胞术中表现出色，它们的高特异性和低非特异性结合特性使得实验结果更加可靠。特别是，Jackson的FabuLight?二抗，由于其单价特性，可以更精确地标记一抗，减少背景染色，提高实验的信噪比。此外，Jackson的ChromPure?蛋白作为实验对照，可以有效地帮助研究人员评估抗体的特异性结合，从而确保实验数据的准确性。这些高质量的产品和对照使得Jackson ImmunoResearch成为流式细胞术研究中不可或缺的合作伙伴。